猪δ冠状病毒RBD蛋白多肽抗体的制备与鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 张国庆

作者： 张国庆;姜宇航;张爽;李乐天;郝嘉翼;陈竞;邹万成;李昌;李太元;高旭;金宁一

作者机构：

关键词： 猪δ冠状病毒（PDCoV）;受体结合结构域（RBD）;抗原表位;多肽抗体

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2023 年 004 期

页码： 1575-1583

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】设计合成猪δ冠状病毒（Porcine deltacoronavirus, PDCoV）受体结合结构域（receptor binding domain, RBD）的抗原表位，制备并鉴定多克隆抗体。【方法】为了特异性检测PDCoV RBD抗原，应用生物信息学技术预测其潜在抗原表位，将表位氨基酸序列与δ冠状病毒属中的其他15株病毒株以及14株其他猪冠状病毒株进行相似性比对，将筛选的优势抗原表位与载体蛋白血蓝蛋白（keyhole limpet hemocyanin, KLH）偶联，合成多肽并免疫小鼠，制备PDCoV RBD特异性抗体。通过Western blotting试验对不同系统表达的PDCoV RBD以及PDCoV、TGEV和PEDV感染ST细胞表达的S蛋白进行鉴定，通过间接ELISA方法测定抗体效价。【结果】经序列比对，利用生物信息学技术预测合成的表位抗原与δ冠状病毒属中的其他15株病毒株（0～14.28%）以及14株其他猪冠状病毒株（0～7.14%）序列相似性非常低，具有良好的保守性；Western blotting结果显示，制备的多肽抗体1∶500、1∶1 000、1∶2 000倍比稀释后均能特异性识别转染pcDNA3.1-PDR-Strep的Expi293F表达的PDCoV RBD蛋白、杆状病毒感染SF9细胞表达的PDCoV RBD蛋白，1∶1 000稀释后能够检测到PDCoV感染ST细胞表达的PDCoV S蛋白，而在TGEV和PEDV感染的细胞中未检测到特异性蛋白的表达；ELISA检测抗血清中多肽特异性抗体的效价可以达到1∶12 800。【结论】利用生物信息学技术成功预测PDCoV RBD蛋白抗原表位，免疫后获得的抗体具有较好的特异性。

分类号： S852.651

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