团头鲂(Megalobrama amblycephala)两种热休克蛋白70(HSP70s)的原核表达、纯化及鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 明建华

作者： 明建华;谢骏;徐跑;戈贤平;刘文斌;叶金云

作者机构：

关键词： 团头鲂;热休克蛋白70;原核表达;融合蛋白;纯化;鉴定

期刊名称： 海洋与湖沼

ISSN： 0029-814X

年卷期： 2012 年 43 卷 01 期

页码： 185-191

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 采用PCR方法扩增团头鲂组成型HSC70和诱导型HSP70基因完整的编码区片段,并分别克隆到原核表达载体pET-22b(+)中,然后转化大肠杆菌BL21(DE3),用1mmol/L IPTG在不同温度及时间下进行诱导表达。采用Ni-NTA His Bind Resins亲和层析和DEAE-Sepharose FF阴离子交换柱层析对目的蛋白进行纯化,并进行SDS-PAGE和Western-blotting分析。结果表明,成功构建了团头鲂两种重组表达质粒pET-22b(+)/Ma-HSC70和pET-22b(+)/Ma-HSP70,表达融合蛋白的相对分子量均约为72kDa,并能与兔抗人HSP70多抗进行特异性结合,这两种HSP70s融合蛋白经纯化后的纯度均达到95%以上。本实验选择融合蛋白Ma-HSC70在25℃和Ma-HSP70在30℃下分别诱导7h作为可溶性表达的最佳条件。

分类号： S917.4

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