垂穗披碱草ISSR反应体系的正交优化

文献类型： 中文期刊

第一作者： 刘新亮

作者： 刘新亮;德英;赵来喜

作者机构：

关键词： 垂穗披碱草;ISSR-PCR;正交优化

期刊名称： 草业科学

ISSN： 1001-0629

年卷期： 2011 年 28 卷 05 期

页码： 38-45

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 以垂穗披碱草(Elymus nutans)基因组DNA为模板,对ISSR-PCR反应体系中5个因素(TaqDNA聚合酶、Mg2+、模板DNA、dNTPs、引物)进行优化试验,建立垂穗披碱草稳定的ISSR-PCR反应体系及最佳扩增程序。在25μL反应体系中,最佳反应体系为2.5μL 10×buffer(不含Mg2+)、1.0 U Taq酶、2.0 mmol/L Mg2+、30～120ng模板DNA、0.25 mmol/L dNTPs、0.25μmol/L引物。在优化体系的基础上筛选出11条多态性丰富,扩增稳定的引物,并通过设置退火温度梯度、循环次数梯度、延伸时间梯度,得到垂穗披碱草ISSR-PCR最佳扩增程序。反应程序:94℃预变性2 min,94℃变性1 min,51℃退火1 min(视不同引物而定),72℃延伸1.5 min,共41个循环,72℃延伸10 min。通过对ISSR-PCR最佳反应体系和最佳扩增程序的验证,发现该反应体系和扩增程序具有较高的稳定性和较好的重复性。

分类号： S543.9

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