鲫脑组织细胞系酵母双杂交cDNA文库的构建及初步应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 许晨

作者： 许晨;周勇;史玉恒;范玉顶;刘文枝;江南;赵建青;曾令兵

作者机构：

关键词： 酵母双杂交;鲫脑组织细胞cDNA文库;鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF25编码蛋白;蛋白质的互作

期刊名称： 淡水渔业

ISSN： 1000-6907

年卷期： 2019 年 49 卷 001 期

页码： 27-32

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为深入研究鲤疱疹病毒Ⅱ 型CyHV-2与宿主细胞相互作用机制,以鲫脑组织细胞系(Gibel carp brain,GiCB)总RNA为模板,反转录合成cDNA,扩增获得双链cDNA,与载体pGADT7-Rec共转化酵母菌Y187,构建了GiCB细胞酵母双杂交cDNA文库.以CyHV-2 ORF25编码蛋白为诱饵,与GiCB细胞酵母双杂交cDNA文库杂交,筛选与其互作的GiCB细胞受体.结果显示:GiCB细胞酵母双杂交cDNA文库转化效率为1.03×106 CFU/μg,滴度为1.24×106 CFU/mL,PCR扩增结果表明文库中插入片段的大小在1.5 kb左右.将表达CyHV-2 ORF25编码蛋白的诱饵菌与GiCB细胞酵母双杂交cDNA文库杂交后,筛选得到与ORF25编码蛋白相互作用蛋白的阳性克隆,为进一步研究CyHV-2的感染机制奠定了前期基础.

分类号： S917.4

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