鼠伤寒沙门菌伴侣蛋白Hfq与oppA mRNA 5′ UTR结合位点的预测与验证分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 张家莉

作者： 张家莉;潘永;杨阳;令狐远凤;杨琦

作者机构：

关键词： 鼠伤寒沙门菌;Hfq;5′UTR;oppA

期刊名称： 中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2023 年 07 期

页码： 1434-1441+1449

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： OppA与鼠伤寒沙门菌氨基酸和肽的摄取有着重要的关系，oppA mRNA是已验证受Hfq伴侣蛋白依赖型小RNA GcvB转录后调控的靶标，GcvB与oppA mRNA的作用机制已经确认，但Hfq与oppA mRNA之间的互作机制尚未明确。为明确Hfq与oppA mRNA潜在的作用位点，分析Hfq与oppA mRNA (ARN)n基序的作用关系。本研究利用5′-RACE验证oppA mRNA转录起始位点和oppA mRNA 5′UTR,使用Mfold软件预测oppA mRNA部分序列的二级结构并根据(ARN)_n基序的特征筛查oppA mRNA 5′UTR的ARN基序，利用λ-Red同源重组技术构建oppA mRNA不同(ARN)n基序敲除和突变的lacZ基因融合菌株，通过qRT-PCR试验和β-半乳糖苷酶试验的检测oppA的转录水平和蛋白表达量的变化。经验证oppA mRNA 5′UTR长度为159 bp,在oppA mRNA 5′UTR中预测到2个Hfq结合偏好型基序ARN-1和ARN-2。对ARN-1和ARN-2基序分别或同时敲除或点突变，oppA mRNA的转录水平和蛋白水平的变化呈现相似的结果。与Western blot相比，oppA基因转录和蛋白水平总体呈下调趋势。综上所述，经预测的ARN-1和ARN-2基序与Hfq转录后负调控oppA mRNA的作用机制无明显的关联，推测其为oppA mRNA翻译所需元件。

分类号： S852.61

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