优化的反向PCR结合TAIL-PCR法克隆棉花线粒体atpA双拷贝基因及其侧翼序列

文献类型： 中文期刊

第一作者： 张晓

作者： 张晓;张锐;孙国清;史计;孟志刚;周焘;侯思宇;梁成真;于源华;郭三堆

作者机构：

关键词： 反向PCR;TAIL-PCR;细胞质雄性不育;棉花;atpA;双拷贝基因;侧翼序列

期刊名称： 生物工程学报

ISSN： 1000-3061

年卷期： 2012 年 28 卷 01 期

页码： 104-115

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 双拷贝基因及其侧翼序列的克隆是分子生物学中的一个难点。将优化的反向PCR(Inverse PCR,iPCR)与TAIL-PCR相结合,有效地克隆双拷贝基因及其侧翼序列。先用Southern blotting方法确定一种能获得合适长度片段的限制性内切酶,然后用优化的iPCR方法对该酶切产物进行自连和扩增,将2个拷贝的侧翼序列区分开。根据iPCR结果,进一步用TAIL-PCR扩增更远侧翼的序列。利用这套方法,获得了棉花可育胞质和不育胞质线粒体双拷贝atpA基因的所有EcoR I限制片段(2.2～5.1 kb)和HindⅢ限制片段(8.5～11.7 kb),克隆到2个拷贝各自的侧翼序列。研究结果说明,优化的iPCR与TAIL-PCR相结合是克隆双拷贝基因及其侧翼序列的一种高效方法。

分类号： S562`Q943.2

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