兔出血症病毒RHDV1和RHDV2一步法双重TaqMan探针荧光定量RT-PCR体系的建立和应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 陈萌萌

作者： 陈萌萌;王冠萱;仇汝龙;范志宇;胡波;宋艳华;魏后军;徐为中;葛雷;李一鸣;王芳

作者机构：

关键词： 兔出血症病毒;荧光定量RT-PCR;TaqMan探针

期刊名称： 江苏农业学报

ISSN： 1000-4440

年卷期： 2025 年 41 卷 005 期

页码： 937-942

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 兔出血症病毒（RHDV）引起的兔出血症是一种急性、高度致死性传染病，对养兔业造成严重危害。本研究基于RHDV衣壳蛋白（VP60）基因序列设计引物和TaqMan探针，建立可同时检测RHDV1和RHDV2两种毒株的双重TaqMan荧光定量RT-PCR检测体系。反应体系：2×One Step RT-PCR BufferⅢ10.0μL,上下游引物（10μmol/L）各0.6μL,ROX Reference DyeⅡ（50×） 0.4μL,两种荧光探针（10μmol/L）各0.8μL,待测样本2.0μL,ddH2O 4.8μL。反应程序：42℃5 min, 95℃10 s, 95℃5 s, 60℃30 s, 40个循环。试验结果表明，该体系特异性强，与轮状病毒、兔多杀性巴氏杆菌、兔支气管败血波氏菌、绿脓杆菌、沙门氏菌无交叉反应；灵敏度高，最低检测限为1μL 100拷贝。通过组内重复和组间重复进行重复性分析，Ct值变异系数为0.2%～2.9%,表明该体系稳定性较好。使用该体系对112份临床样本（60份肝脏组织、52份鼻肛拭子）进行检测，RHDV总检出率为69%,而常规RT-PCR体系的检出率仅为51%。本研究建立的双重荧光定量RT-PCR方法具有高灵敏度、强特异性和良好的重复性，可为RHDV的临床快速诊断及定量分析提供可靠技术支持。

分类号： S852.65

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