不同长度茎部shRNA表达载体构建与鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 刘中华

作者： 刘中华;乔宪凤;肖红卫;刘西梅;王华岩;郑新民

作者机构：

关键词： 基因沉默;shRNA;绿色荧光蛋白;小鼠;荧光定量PCR

期刊名称： 生物工程学报

ISSN： 1000-3061

年卷期： 2010 年 26 卷 03 期

页码： 386-392

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 本研究针对同一目的基因设计构建不同茎部长度的shRNA表达载体,并对其在细胞及胚胎水平的干扰效应做一比较。以绿色荧光蛋白基因为沉默效应的靶基因,设计茎部长度分别为21bp、27bp、29bp的干扰片段,退火后连入带有H6启动子的真核表达载体psiSTRIKE中(分别命名为EGFP-21siRNA、EGFP-27siRNA和EGFP-29siRNA),将构建成功的载体以脂质体法转染小鼠胚胎成纤维细胞,利用荧光定量PCR对其荧光表达进行精确定量。不同茎部长度的shRNA载体均使绿色荧光蛋白基因表达降低,茎部为29bp时比21bp、27bp表现出更明显的沉默效应。细胞水平沉默效应的初步验证,为筛选适合小鼠个体水平的最佳发夹结构奠定了基础。

分类号： Q78

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