基于高通量测序的梅花鹿卵巢衰老的转录组分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 林乐丰

作者： 林乐丰;刁云飞;范冰峰;刘理想;邵静;赵向远;许保增

作者机构： 中国农业科学院特产研究所

关键词： 梅花鹿;卵巢衰老;RNA-Seq;H3K4me3

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2023 年 08 期

页码： 3157-3170

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】获取青年梅花鹿和老年梅花鹿卵巢组织的转录组信息，为深入研究梅花鹿卵巢衰老的潜在机制提供依据。【方法】以4岁龄青年梅花鹿和10岁龄老年梅花鹿卵巢作为试验样本，对样本进行石蜡切片、苏木精-伊红染色和卵泡计数；用Trizol法提取卵巢样本RNA构建转录组文库，应用Illumina HiSeq~(TM)2000测序平台测序，对测序结果进行差异表达基因、GO功能、KEGG通路和蛋白互作网络分析，并挑选部分差异表达基因进行实时荧光定量PCR验证。通过RIPA裂解液提取卵巢样本蛋白并对组蛋白H3赖氨酸4三甲基化(H3K4me3)蛋白在青年和老年梅花鹿中的表达情况进行Western blotting检测。【结果】组织学分析结果表明，老年梅花鹿的卵巢卵泡数显著低于青年梅花鹿(P<0.05),而闭锁卵泡数极显著高于青年梅花鹿(P<0.01)。转录组学分析结果表明，老年和青年梅花鹿卵巢间共有1 477个差异表达基因，其中表达上调基因503个，表达下调基因974个。GO功能和KEGG通路富集结果表明，免疫系统过程、转录、DNA损伤修复、炎症反应、凋亡等生物事件与卵巢衰老有关。实时荧光定量PCR结果显示，共有17个基因在老年和青年梅花鹿卵巢中表达量差异达显著或极显著水平(P<0.05;P<0.01),表明RNA-Seq结果可靠。Western blotting结果表明，H3K4me3蛋白在老年和青年梅花鹿卵巢中表达量存在显著差异(P<0.05)。【结论】青年和老年梅花鹿卵巢在卵泡数方面存在显著差异，通过RNA-Seq筛选出PI3K-Akt信号通路影响DNA损伤修复效率，参与梅花鹿卵巢衰老。H3K4me3在老年梅花鹿卵巢中高表达与转录激活有关。

分类号： S825.2

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