T4溶菌酶在多型汉逊酵母中的表达及抑菌活性测定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王楠

作者： 王楠;王跃驹;李刚强;孙宁;刘德虎

作者机构：

关键词： T4溶菌酶;抗菌活性;汉逊酵母;pGAP;rDNA

期刊名称： 中国科学. 生命科学

ISSN： 1674-7232

年卷期： 2011 年 41 卷 4 期

页码： 313-319

收录情况： CSCD

摘要： 溶菌酶是一类对多种细菌都具有明显杀菌效果的蛋白质.本研究将T4溶菌酶基因构建到毕赤酵母表达载体pPIC9K中,以汉逊酵母A16来源的rDNA序列作为同源重组序列,在毕赤酵母甘油醛-3-磷酸脱氢酶启动子(pGAP)的调控下,使T4溶菌酶在汉逊酵母A16中以组成型方式稳定高效表达.在37℃,pH6.0,摇瓶发酵培养72h后,表达量达到0.49g/L.结果表明,汉逊酵母能够识别源自毕赤酵母的甘油醛-3-磷酸脱氢酶启动子和醇氧化酶终止子序列,而且rDNA作为同源重组序列可以产生多拷贝的汉逊酵母重组子.对重组蛋白进行了N端测序、质谱及SDS-PAGE检测,发现重组蛋白N端与T4溶菌酶N端氨基酸序列一致,分子量大小约为18.7kD,与预计分子量大小相符.重组T4溶菌酶对革兰氏阳性和阴性细菌都具有抑菌活性和溶壁活性.非变性SDS-PAGE(无DTT)检测发现,重组T4溶菌酶形成了分子内二硫键和少量分子间二硫键,这种不正确的二硫键可能导致重组T4溶菌酶损失部分抗菌活性.

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[1]T4溶菌酶在多型汉逊酵母中的表达及抑菌活性测定. 王跃驹,李刚强,孙宁,刘德虎. 2011

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