布鲁氏菌Omp19基因的生物信息学分析、克隆表达和ELISA方法的初步建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 杨宁宁

作者： 杨宁宁;王震;杨亚军;张倩;宋胜男;张欢;陈创夫;刘明军

作者机构：

关键词： 布鲁氏菌;Omp19基因;生物信息学分析;反应原性

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2020 年 010 期

页码： 3078-3087

收录情况： 北大核心

摘要： 为了进一步研究布鲁氏菌外膜蛋白19(outer membrane protein 19,OMP19)的结构与功能,并获得具有反应原性的OMP19重组蛋白,建立布鲁氏菌间接ELISA抗体检测方法,试验通过生物信息学软件对OMP19蛋白进行氨基酸序列分析,经PCR技术克隆Omp19基因,利用无缝克隆技术构建重组表达载体pET-32a-Omp19,将其转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,诱导其表达并纯化,并通过Western blotting和ELISA分析方法分别检测OMP19蛋白的反应原性,以建立基于该蛋白的间接ELISA方法.结果显示,OMP19蛋白N端有19个信号肽序列,二级结构以无规则卷曲为主,且OMP19蛋白含有优势抗原表位,利用PCR技术和无缝克隆技术成功构建了Omp19基因的原核表达载体pET-32a-Omp19,成功诱导表达并纯化了OMP19融合蛋白,大小约为35 ku,与理论值相符,并通过Western blotting和ELISA方法鉴定OMP19的反应原性,结果表明该蛋白具有较好的反应原性,且包被浓度为10μg/mL,一抗稀释比为1∶50,二抗稀释比为1∶8 000时,P/N值最大,为2.80.本研究结果为布鲁氏菌病快速诊断方法的建立和新型疫苗的研发奠定了理论基础.

分类号： S852.61

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