非洲猪瘟病毒一步法巢式锁核酸荧光定量PCR方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 施科达

作者： 施科达;徐民生;李艳;张昆丽;翟少伦;勾红潮;宋帅;杨冬霞;臧莹安;孙铭飞;李春玲

作者机构：

关键词： 非洲猪瘟病毒;B646L（P72）蛋白基因;锁核酸修饰;一步法巢式荧光定量PCR

期刊名称： 中国农学通报

ISSN： 1000-6850

年卷期： 2023 年 011 期

页码： 143-151

收录情况： CSCD

摘要： 试验基于非洲猪瘟病毒（African swine fever virus,ASFV）B646L（P72）蛋白基因序列，建立一种高灵敏度和高特异性的检测方法。采用Oligo 7软件设计一步法巢式锁核酸荧光定量PCR（One Step NestedLocked Nucleic Acid real-time PCR,LNA-OSN-PCR）的嵌套引物以及探针，并对外引物进行锁核酸修饰。建立并优化LNA-OSN-PCR反应体系和条件，确立LNA-OSN-PCR标准曲线，并检验LNA-OSN-PCR方法的灵敏度、特异性和重复性。采用LNA-OSN-PCR方法，对96份临床疑似患病样品进行检测，同时与普通荧光探针PCR方法进行比较。试验确立并优化了LNA-OSN-PCR的反应条件和体系，建立的LNA-OSN-PCR标准曲线，具有较好的线性（R~2=0.9945）。该方法的最低检测限为3×10-1copies/μL，变异系数小于3%，并且与其他病毒或细菌核酸无交叉反应。LNA-OSN-PCR方法与OIE推荐的荧光定量PCR方法比较，检测灵敏度提高10～100倍，在对96份临床疑似患病核酸样品进行检测中，检出55份阳性，41份阴性，比常规的荧光定量PCR具有更高的阳性检出率。并且能获得典型的扩增曲线。试验结合一步法巢式PCR和锁核酸修饰，建立了ASFV一步法巢式锁核酸荧光定量PCR，为检测ASFV提供一种高灵敏度和高特异性且经济实惠的检测方法。

分类号： S852.65

  • 相关文献

[1]非洲猪瘟及防控技术研究现状. 扈荣良,于婉琪,陈腾. 2019

[2]非洲猪瘟病毒PCR检测方法的建立. 李云灿,胡剑武,赵俊龙,李家奎. 2021

[3]非洲猪瘟病毒p72蛋白N末端的原核表达及间接ELISA检测方法的建立. 姜林林,宋帅,蔡汝健,蒋智勇,李艳,勾红潮,楚品品,李春玲. 2021

[4]非洲猪瘟病毒锁核酸探针荧光定量PCR检测方法的建立. 李艳,郭怡德,勾红潮,卞志标,孙铭飞,蔡汝健,宋帅,蒋智勇,楚品品,徐民生,杨东霞,李春玲. 2021

[5]非洲猪瘟病毒结构蛋白基因重组痘苗病毒的构建及鉴定. 张会雷,刘任强,张敏敏,王喜军,葛金英,温志远,步志高. 2017

[6]非洲猪瘟病毒蛋白功能研究进展. 郭怡德,李冰,蔡汝健,蒋智勇,宋帅,勾红潮,李艳,楚品品,杨冬霞,卞志标,李春玲,臧莹安. 2020

[7]非洲猪瘟病毒的基因特征. 谢春芳,于瑞嵩,董世娟,陈冰清. 2020

[8]非洲猪瘟病毒多表位融合蛋白P72的构建、表达及免疫学特性研究. 郭晶,李重阳,孟庆玲,乔军,伍晔晖,王立霞,马帅,才学鹏. 2019

[9]非洲猪瘟病毒荧光定量PCR的建立及4种检测试剂盒的比较. 肖琦,蒋彩霞,史慧,赵霞玲,钱雯娴,朱家平,张冯禧,温立斌,汪伟,何孔旺. 2021

[10]非洲猪瘟病毒的免疫逃逸策略. 孙茂文,王涛,孙元,杨玉莹,仇华吉. 2021

[11]MicroRNA在非洲猪瘟研究中的应用. 张兆博,张思诗,汉可欣,李晓易,文雪霞,汉丽梅. 2021

[12]非洲猪瘟病毒p30蛋白的真核表达纯化及单克隆抗体的制备. 刘靖,钟杰,陈伟业,王晗,张经伟,步志高,华荣虹. 2021

[13]非洲猪瘟病毒荧光定量PCR检测方法的建立. 余斌,徐丽华,李军星,苏菲,叶十一,袁秀芳. 2023

[14]半固体培养法制备非洲猪瘟病毒pA104R蛋白的单克隆抗体. 刘蓓蓓,韦艳娜,陈蓉,谢星,倪博,郝飞,张珍珍,白昀,袁厅,冯志新. 2024

[15]非洲猪瘟病毒D1133L蛋白增加宿主波形蛋白磷酸化而促进病毒在猪巨噬细胞中的复制. 陈玲玲,张婷,郝雨,杨金柯,史喜绢,张大俊,杨行,赵登率,闫文倩,别鑫恬,陈国辉,郑海学,乐涛,张克山. 2024

[16]非洲猪瘟病毒p30蛋白在本氏烟草中的表达及其抗体间接ELISA检测方法的建立. 刘悦,魏天,张春雨,张建峰,王成宇,张芳毓,朱日宁,鞠安琪,王思月,曲磊,张守峰,扈荣良,梁静,王永志. 2024

[17]口蹄疫病毒与非洲猪瘟病毒的比较. 李冬. 2020

[18]非洲猪瘟病毒p30蛋白单克隆抗体制备及线性抗原表位定位. 魏天,王成宇,王凤杰,李忠鹏,张芳毓,张守峰,扈荣良,吕礼良,王永志. 2022

[19]非洲猪瘟病毒pS273R蛋白水解酶单克隆抗体制备. 张萌,刘英楠,谢振华,敖清莹,吕璐,于婉琪,金文杰,秦爱建,扈荣良,陈鸿军. 2021

[20]非洲猪瘟病毒的分子病原学及致病机理研究进展. 欧云文,阎传忠,张杰,马炳,代军飞,张永光,贾宁. 2017

作者其他论文 更多>>

微信小程序