禽脑脊髓炎病毒VP3基因的克隆与表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 李涛

作者： 李涛;葛俊伟;关云涛;陈洪岩

作者机构：

关键词： 脑脊髓炎病毒,禽;RT-PCR;基因,VP3,克隆,分子;序列分析;基因表达

期刊名称： 中国比较医学杂志

ISSN： 1671-7856

年卷期： 2006 年 16 卷 12 期

页码： 744-748+751

摘要： 目的对VP3进行克隆和测序后,在杆状病毒系统中表达获得重组蛋白,为AEV的分子诊断以及更深一层次的分子和基因工程研究打下基础。方法利用RT_PCR技术,从AEV VR株感染的SPF鸡胚脑及内脏器官组织中提取病毒RNA并扩增出VP3目的基因,而后克隆到pMD18-T载体中,鉴定后进行序列测定;应用Bac_to_Bac杆状病毒表达系统,将VP3基因定向克隆到pFastBacHTa donor质粒中,经转座反应,筛选到VP3_Bacmid重组子,转染sf9昆虫细胞并盲传三代,提取DNA应用PCR方法鉴定证实获得含VP3的重组病毒,Western blot鉴定VP3在杆状病毒系统中得以表达。结果AEV VR株VP3基因全长735 bp,共编码245个氨基酸,与AEV_1143标准毒株相应片段的核苷酸和氨基酸同源性分别为93%和97%;并将其与其它小RNA病毒进行了比较;Western blot鉴定结果,重组蛋白大小约27 ku。结论本研究通过RT_PCR技术首次从体外成功扩增AEV Van_Roekel株VP3蛋白基因,并对其进行克隆、测序;应用Bac_to_Bac杆状病毒表达系统成功地表达了VP3基因并获得了具有良好免疫活性的重组蛋白。

分类号： S852.65

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