靶向伪狂犬病病毒UL35基因的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法的建立

文献类型: 中文期刊

第一作者: 张心雨

作者: 张心雨;吴红霞;李永锋;孙元;付强;仇华吉

作者机构:

关键词: 伪狂犬病病毒;UL35基因;SYBR Green Ⅰ;定量PCR

期刊名称: 中国兽医学报

ISSN: 1005-4545

年卷期: 2024 年 44 卷 011 期

页码: 2334-2340

收录情况: 北大核心 ; CSCD

摘要: 对伪狂犬病病毒(pseudorabies virus, PRV)感染后不同时间点UL35和gB基因的进行定量分析,发现在感染细胞后2.5、5.0以及20.0 h时,两者基因组拷贝数具有显著差异,并且在PRV感染早期可以观察到UL35基因的表达。为了确定UL35基因能否作为诊断PRV感染的靶标,本研究根据PRV不同毒株UL35基因保守序列,设计合成特异性荧光定量PCR引物,扩增长度为54 bp的片段。通过优化反应条件和反应体系,结果显示,建立的PRV SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法具有良好的重复性和特异性,其标准曲线与模板浓度呈现良好的线性关系;对猪繁殖和呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)、猪瘟病毒(classical swine fever virus, CSFV)、非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)核酸扩增均呈阴性;将所建立的方法与同类方法进行比较,敏感性无差异;组间和组内重复性试验的变异系数小于2%。用本试验所建立的方法对PRV感染小鼠的组织样品进行检测,均检测到一定的病毒载量。结果表明,UL35基因可以作为诊断PRV感染的靶标。

分类号: S852.65

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