猪胸膜肺炎放线杆菌血清1型信号标签诱导突变体库的构建

文献类型： 中文期刊

第一作者： HE Ming-lei

作者： HE Ming-lei;赫明雷;刘慧芳;刘思国;司薇;王春来;杨金国;杜艳芬;王聃

作者机构：

关键词： 胸膜肺炎放线杆菌;转座子;信号标签

期刊名称： 中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2009 年 17 卷 01 期

页码： 38-44

摘要： 本研究以自杀性质粒pUT携带含有信号标签的Mini-Tn5转座子对猪胸膜肺炎放线杆菌血清1型菌进行转座诱变,构建了带有12对特异性信号标签的Mini-Tn5转座子的pUT自杀质粒,转化到供体菌E.coliβ2155后,利用双亲本滤膜杂交法与受体猪胸膜肺炎放线杆菌血清1型菌(APP1)进行接合转移,构建并优化了接合转移体系。利用抗性和营养缺陷培养平板筛选得到接合突变体,通过抗性通用引物与12个特异标签引物和胸膜肺炎放线杆菌毒素IV(ApxIV)鉴定引物分别对这些突变体进行了PCR鉴定和测序验证。结果表明,经过加入标签的Mini-Tn5转座子可以通过接合转移的方式从供体菌E.coliβ2155中插入到APP1基因组当中,并成功构建了12个含有特异信号标签的重组质粒,获得了APP1的12个转座突变体库,经筛选鉴定后得到561个突变株。这为研究APP1的功能基因和筛选特定突变株提供了必要的基础。

分类号： S852.619

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