农杆菌介导的AtMYB118基因转化橡胶树易碎胚性愈伤组织体系优化(英文)

文献类型： 中文期刊

第一作者： 毕政鸿

作者： 毕政鸿;李哲;王志秋;戴雪梅;方家林;黄华孙;林位夫;LARDE TLudovic;MONTORO Pascal;CARRON Marc-Philippe;LECLERCQ Julie;左建儒;牟金叶;杨晓辉;李响

作者机构：

关键词： 橡胶树;农杆菌介导的遗传转化;AtMYB118基因;反转录PCR;易碎胚性愈伤组织;转基因植株

期刊名称： 南方农业学报

ISSN： 2095-1191

年卷期： 2014 年 45 卷 07 期

页码： 1137-1146

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】采用正交设计L25(56)优化农杆菌介导的AtMYB118基因对橡胶树易碎胚性愈伤组织的遗传转化体系,为橡胶树品种遗传改良提供参考。【方法】以75.0 mg/L卡那霉素筛选经过转化的愈伤组织;采用GUS瞬时表达检测方法评价6个因素即预培养时间、农杆菌菌液浓度(OD600)、乙酰丁香酮(AS)浓度、侵染时间、共培养温度和共培养时间对遗传转化的影响。【结果】6个因素显著影响橡胶树长期培养的易碎胚性愈伤组织的转化频率,易碎胚性愈伤组织遗传转化优化条件为:预培养0 d,菌液OD600为0.7,侵染时间7 min,共培养时间5 d,AS 200μmol/L,共培养温度25℃。在此优化条件下可获得最高转化频率。经过4~6个月的筛选,获得17个GUS染色阳性的易碎愈伤组织系。经PCR和反转录PCR分析转化愈伤组织,进一步证实uidA、nptII、AtMYB118基因已被整合到愈伤组织基因组中并表达。培养获得1539个胚状体,其中164个为转基因胚状体,转化频率为10.6%;最终获得4株转AtMYB118基因植株。【结论】优化获得可行有效的橡胶树易碎胚性愈伤组织遗传转化体系,可为其品种遗传改良提供技术支持。

分类号： S794.1

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