粘虫EF-1a和AK基因的克隆及实时RT-PCR方法建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 段云

作者： 段云;巩中军;蒋月丽;吴潇博;李彤;苗进;武予清

作者机构：

关键词： 粘虫;延伸因子;精氨酸激酶;克隆;反转录实时定量PCR

期刊名称： 中国农学通报

ISSN： 1000-6850

年卷期： 2016 年 32 卷 11 期

页码： 27-32

收录情况： CSCD

摘要： 为今后利用SYBR GreenⅠ荧光定量法研究粘虫EF-1a和AK基因的表达情况,设计合成用于PCR扩增的引物,运用RT-PCR方法克隆EF-1a和AK基因片段,并进行序列同源性分析;然后采用SYBR GreenⅠ荧光定量法设计特异性引物进行RT-PCR扩增,通过熔解曲线和标准曲线分析等建立实时RT-PCR方法。结果表明,从粘虫中克隆获得EF-1a和AK基因片段长度分别为622 bp和1020 bp,分别编码207个氨基酸和339个氨基酸;序列同源性分析结果表明,粘虫EF-1a与鳞翅目昆虫家蚕、桦尺蠖和柑桔凤蝶的氨基酸序列同源性为95%以上;AK与鳞翅目昆虫草地贪夜蛾、烟蚜夜蛾、棉铃虫、斜纹夜蛾和甜菜夜蛾的氨基酸序列同源性为98%以上。熔解曲线和标准曲线结果显示,设计的EF-1a和AK基因引物均可应用于实时RT-PCR扩增。

分类号： S433.4

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