靶向脑心肌炎病毒VP1基因的shRNA对脑心肌炎病毒复制的抑制作用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 冯若飞

作者： 冯若飞;李向茸;张海霞;张蕾;马忠仁

作者机构：

关键词： 脑心肌炎病毒;RNA干扰;shRNA;VP1基因

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2014 年 06 期

页码： 551-557

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 选择脑心肌炎病毒(EMCV)VP1基因,探讨了shRNA对EMCV复制的影响。设计合成4对编码siRNA的VP1基因的DNA序列,分别构建pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR干扰载体X109-1、X109-2、X109-3和X109-4,脂质体介导转染至BHK21细胞,接种EMCV。病毒TCID50和实时荧光定量PCR结果表明,4种重组EMCV VP1shRNA对EMCV的复制均有抑制作用,其中X109-2的抑制作用最显著。X109-2转染BHK21细胞后分别接种EMCV、口蹄疫病毒(FMDV)、乙型脑炎病毒(JEV),EMCV的lgTCID50为3.5,FMDV和JEV的lgTCID50均在7.0以上,说明重组shRNA质粒对EMCV复制的抑制具有明确的特异性和干扰的靶向性。X109-2和pEGFP-VP1真核表达载体共转染CHO-K1细胞后,RT-PCR和Western-blot检测结果表明,VP1shRNA可抑制pEGFP-VP1在细胞中的蛋白表达,进一步证明了干扰载体的靶向性。上述结果为进一步研究EMCV的感染和复制机制奠定了基础。

分类号： S852.65

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