榴莲蜜基因组DNA提取方法比较及SCoT反应体系的优化

文献类型： 中文期刊

第一作者： 崔健

作者： 崔健;胡福初;陈哲;郭利军;段恋

作者机构：

关键词： 榴莲蜜;DNA提取;SCoT;PCR反应体系

期刊名称： 分子植物育种

ISSN： 1672-416X

年卷期： 2017 年 04 期

页码： 1338-1346

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 本研究以榴莲蜜(Artocarpus integer(Thunb.)Merr.)品种‘多异1号’嫩叶为试材,通过比较5种CTAB法,提取到高质量的榴莲蜜基因组DNA,利用正交设计L25(56)探究了Mg~(2+)、dNTPs、Taq DNA聚合酶、引物及模板DNA用量对榴莲蜜SCoT-PCR反应的影响,在此基础上对退火温度进行了优化,建立了SCoT反应体系。结果表明:使用含有4%β-巯基乙醇和12.5 mmol/L硼砂的2%CTAB提取缓冲液,两次抽提后用1/2体积无水乙醇和与上清等体积的4 mol/L LiCl沉淀RNA,能够提取到高质量的基因组DNA;优化后的20μL榴莲蜜SCoT-PCR反应体系含有Mg~(2+) 2 mmol/L、dNTPs 0.2 mmol/L、Taq DNA聚合酶1 U、引物0.375 mol/L、模板DNA 10 ng,最适退火温度48.2℃。该体系可以为榴莲蜜遗传多样性分析、基因定位等提供技术支持。

分类号： Q943.2`S667.8

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