文献类型： 中文期刊
第一作者： 虞凌雪
作者： 虞凌雪;周艳君;姜一峰;童武;高飞;夏天奇;王康;杨莘;李丽薇;程群;童光志
作者机构：
关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒;GM-CSF;rHN4-△110-GM-CSF
期刊名称： 中国预防兽医学报
ISSN： 1008-0589
年卷期： 2014 年 36 卷 4 期
页码： 260-264
收录情况： CSCD
摘要： 为提高猪繁殖与呼吸障碍综合征(PRRS)弱毒疫苗的免疫效果,本研究以高致病性PRRS 弱毒疫苗株HuN4-F112感染性分子克隆为基础,在NSP2区域删除了110个氨基酸,将猪源GM-CSF 基因和PRRSV ORF6转录引导序列(TRS6)通过融合PCR 方法插入HuN4-F112疫苗株的ORF1b 和ORF2a 之间,构建了全长重组质粒pHN4-△110-GM-CSF。将该重组质粒采用Swa Ⅰ酶切线性化,经体外转录病毒基因组RNA 后转染BHK-21细胞,然后在Marc-145细胞中进行病毒拯救及传代。结果显示重组病毒感染Marc-145细胞可以引起明显的细胞病变;经RT-PCR、DNA 测序、Mlu Ⅰ酶切鉴定和免疫荧光鉴定结果显示,救获的重组PRRSV 含有GM-CSF 基因并能够有效表达,将其命名为rHN4-△110-GM-CSF。生物学特性分析表明重组病毒与亲本病毒在Marc-145细胞中具有相似的生长特性,插入的外源基因具有良好的遗传稳定性。由于GM-CSF 能够活化树突状细胞,是一种良好的免疫佐剂。该重组病毒的构建为动物体内免疫保护攻毒试验评价奠定了基础。
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