文献类型： 中文期刊
第一作者： 肖丽
作者： 肖丽;赵淑庆;袁雪松;范丽原;易鑫;陈琢琦;李彬;李基棕;主性
作者机构：
关键词： 293T细胞系;PDCoV;慢病毒;稳定表达
期刊名称： 中国兽医学报
ISSN： 1005-4545
年卷期： 2024 年 005 期
页码： 959-965
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 为构建稳定表达猪δ冠状病毒（PDCoV）S和RBD蛋白的293T细胞系，获得PDCoV S和RBD蛋白。本研究将优化合成的PDCoV S蛋白全长基因及其RBD的表达质粒进行双酶切鉴定，将重组质粒pLV-S-Puro、pLV-RBD-Puro、psPRX2、pMD2.G同时转染293T细胞中进行慢病毒包装，收集上清感染293T细胞，经嘌呤霉素初筛得到的多细胞克隆，进一步通过终点稀释法筛选获得稳定表达PDCoV S和RBD蛋白的单克隆293T细胞系，通过Western blot检测蛋白表达，用纯化的PDCoV S和RBD蛋白分别免疫BALB/c小鼠，对重组蛋白进行免疫原性检测。结果表明，稳定表达PDCoV S和RBD蛋白的293T细胞系构建成功，获得了重组慢病毒，纯化PDCoV S和RBD重组蛋白均可以诱导小鼠产生较高的IgG抗体（S:1.2;RBD:0.9）,中和抗体水平分别达1∶128和1∶64。本研究构建的293T细胞系能稳定表达PDCoV S和RBD蛋白，为进一步研制PDCoV亚单位疫苗奠定了基础。
分类号： S852.65
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