微小隐孢子虫P23基因在毕赤酵母中的表达及初步应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 黄燕

作者： 黄燕;米荣升;周鹏;曹薇;杨晓娇;王向佩;王晓娟;石凯;陈兆国

作者机构：

关键词： 微小隐孢子虫;P23基因;巴斯德毕赤酵母;真核表达

期刊名称： 中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2012 年 20 卷 06 期

页码： 56-62

摘要： 为将微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)P23基因在巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)系统中进行表达,利用表达蛋白初步建立隐孢子虫病间接ELISA诊断技术,设计引物从微小隐孢子虫基因组DNA中扩增P23基因序列,构建pPIC9K-P23重组质粒,在毕赤酵母中进行表达,用阴离子交换层析柱进行纯化。以重组P23纯化蛋白为抗原建立间接ELISA检测方法,对现场采集的猪血清样品进行检测。SDS-PAGE显示所表达的蛋白大小约为23 kDa。Western blot检测表明该蛋白能与兔抗P23蛋白血清特异性结合。用建立的间接ELISA技术对186份猪血清样品进行检测,阳性率为83.3%。本研究获得了真核表达的P23重组蛋白,初步建立了微小隐孢子虫病间接ELISA诊断技术,为隐孢子虫病的诊断和流行病学调查打下了基础。

分类号： S852.723

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