水稻中cry1Ah1基因密码子优化方案的比较

文献类型： 中文期刊

第一作者： 周宗梁

作者： 林智敏;耿丽丽;苏军;束长龙;王锋;朱延明;张杰

作者机构：

关键词： cry1Ah1基因;水稻;密码子优化;实时荧光定量PCR;酶联免疫

期刊名称： 生物工程学报

ISSN： 1000-3061

年卷期： 2012 年 28 卷 10 期

页码： 1184-1194

收录情况： CSCD

摘要： cry1Ah1基因是本实验室克隆的具有自主知识产权的模式基因,对鳞翅目害虫水稻二化螟等具有高毒力,具有较好的应用前景。为提高cry1Ah1基因在水稻中的表达量,探讨密码子使用频率对基因表达的影响,依据水稻密码子使用频率设计5种不同的优化方案,提高GC含量并去除剪切信号等不稳定因素后合成cry1Ah1基因杀虫活性区域。优化后的基因在大肠杆菌Rosetta(DE3)中正常表达了65 kDa蛋白,表达蛋白对2龄小菜蛾和水稻二化螟初孵幼虫都具有良好的杀虫活性。优化的基因转化水稻日本晴后,PCR阳性率达到87%以上,实时荧光定量RT-PCR和ELISA分析表明全部采用最高频率密码子的优化方案效果最好,Cry1Ah蛋白平均表达量占可溶性蛋白的0.104%。

分类号： S511

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