人朊蛋白基因的克隆与原核表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 姜海霞

作者： 姜海霞;刘永生;杨孝朴;陈豪泰;朱小玲;张杰;谢庆阁

作者机构：

关键词： 人;朊蛋白基因;克隆;原核表达

期刊名称： 甘肃农业大学学报

ISSN： 1003-4315

年卷期： 2006 年 41 卷 03 期

页码： 17-21

收录情况： CSCD

摘要： 以人血液中提取的总DNA为模板,克隆朊蛋白(prion protein,PrP)基因Prnp户的开放阅读框(ORF),与pMD -18T载体连接后转入E．coli JM109,用Blast软件比较重组质粒序列,结果表明获得的人Prnp的ORF与Genbank登录的相应核苷酸序列最高同源性为99．6％,推导的氨基酸序列同源性为99．8％,将编码人成熟PrP的基因定向克隆到 pET-30a(+)表达载体,将重组质粒pET-homPrP转化E．coli BL21(DE3),在37℃下用1．0 mmol／L IPTG诱导,重组融合蛋白获得高效表达,SDS-PAGE显示表达产物以包涵体形式存在,占菌体总蛋白的20％～25％．用Ni-NTA 树脂亲和层析纯化了表达产物．Western-blotting分析表明,融合蛋白被抗PrP的单克隆抗体特异识别．因此,在大肠杆菌中表达的人成熟PrP融合蛋白可以作为制备PrP抗体的免疫原．

分类号： Q78

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