李矮缩病毒外壳蛋白基因克隆及原核表达研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 陈立伟

作者： 陈立伟;宗晓娟;王文文;王甲威;魏海蓉;徐丽;严雪瑞;刘庆忠

作者机构：

关键词： 李矮缩病毒;外壳蛋白;基因克隆;原核表达

期刊名称： 中国农学通报

ISSN： 1000-6850

年卷期： 2012 年 28 卷 12 期

页码： 177-181

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为制备李矮缩病毒(prunus dwarf virus,PDV)抗血清,克隆PDV外壳蛋白(CP)基因,构建原核表达载体,优化蛋白表达条件。以阳性感病甜樱桃叶片为试验材料,提取总RNA,根据PDV CP基因(L28145.1)设计特异引物,RT-PCR方法扩增,克隆、测序,构建原核表达载体pET30a-PDVCP,在大肠杆菌BL21(DE3)菌株表达。PDV CP基因(GenBank登录号:JF333587.1)全长657 bp,编码217个氨基酸,与GenBank其他PDV分离物CP基因核苷酸序列的同源性为89.2%~93.9%,推导的氨基酸序列同源性为97%~99%。根据完整CP基因核苷酸序列构建系统进化树显示:12个PDV分离物可分为3组,泰安分离物与巴西、土耳其等分离物属于Ⅰ组。成功构建原核表达载体pET30a-PDVCP,并在体外条件下诱导表达出融合蛋白。转pET30a-PDVCP载体的大肠杆菌BL21(DE3)菌株表达分子量约24 kDa的重组蛋白。该重组蛋白在30℃,1.0 mmol/L IPTG、诱导4 h表达量最大。

分类号： S436.62

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