传染性法氏囊病病毒VP2单克隆抗体夹心ELISA检测试剂盒的研制

文献类型： 中文期刊

第一作者： 刘静静

作者： 刘静静;王永山;欧阳伟;夏兴霞;潘群兴;王晓丽;毕振威;诸玉梅;朱瑞良

作者机构：

关键词： 传染性法氏囊病病毒(IBDV);VP2;单克隆抗体(mAb);夹心ELISA

期刊名称： 中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2014 年 34 卷 04 期

页码： 530-535

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为研制传染性法氏囊病病毒(IBDV)快速检测试剂盒,用重组IBDV-VP2蛋白免疫BALB/c小鼠,制备免疫脾细胞,与SP2/0骨髓瘤细胞触合,获得3株稳定分泌抗VP2蛋白单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株,分别命名为1D11、2G8和2E5,抗体亚类分别为IgG1κ、IgG2bκ和IgG1κ。间接免疫荧光试验(IFA)证明,3株单抗均与VP2发生特异性反应。相加ELISA证明3株mAb识别VP2不同的抗原表位。在病毒中和试验中,1D11和2G8腹水对IBDV的中和效价分别为104和103,而2E5无中和活性。用亲和层析方法纯化1D11和2E5,分别作为包被抗体和标记抗体,建立了IBDV夹心ELISA检测方法,优化了试验条件,测定了其主要性能指标,对IBDV的最低检出量为102 TCID50/mL。用夹心ELISA、AGP和RT-PCR 3种方法同步检测8种试验样品,夹心ELISA与RT-PCR的检测结果一致,显著高于AGP方法。组装成的试剂盒,置于37℃保存7d、4℃保存6个月和-20℃保存24个月,其检测结果没有显著差异(P>0.05)。

分类号： S852.65

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