肝特异性表达Cre重组酶转基因猪成纤维细胞的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 杨春

作者： 杨春;朱洪伟;刘宗岳;王桂武;杨福合;邢秀梅

作者机构：

关键词： Cre重组酶;肝脏特异性启动子;真核表达载体;三重融合PCR;细胞转染

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2012 年 39 卷 10 期

页码： 145-149

收录情况： 北大核心

摘要： 试验旨在建立肝脏特异性表达Cre重组酶猪成纤维细胞系,为获得肝脏特异性表达Cre重组酶转基因猪奠定基础。通过PCR方法分别从血液和pcDNA3.1(+)载体上扩增肝脏特异性启动子α1-抗胰蛋白酶启动子(PhAAT)和BGHpolyA片段。通过双酶切(XhoⅠ、SalⅠ)从载体pGC-FRT2neo上获得FRT2neo交换盒,再利用重叠PCR方法获得猪源的Cre重组酶基因,最后通过三重融合PCR方法和酶切方法将4个片段连接。利用真核表达载体pC1-neo构建出Cre表达载体pC1-PhAATCreBGHpolyA-FRT2neo。LipofectamineTM2000介导转染猪成纤维细胞,通过G418筛选出阳性细胞系,最后通过PCR鉴定证明构建的Cre重组酶表达载体pC1-PhAATCreBGHpolyA-FRT2neo成功整合到细胞的基因组中,获得了肝脏特异性表达Cre重组酶猪成纤维细胞,为最终通过核移植方法获得肝脏特异性表达Cre重组酶转基因猪奠定基础。

分类号： S828

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