基于Qbeta噬菌体装甲RNA技术的诺如病毒RNA标准参考样品的研制

文献类型： 中文期刊

第一作者： 张奇

作者： 张奇;姚琳;江艳华;李风铃;张媛;许东勤;朱文嘉;郭莹莹;王联珠;翟毓秀

作者机构：

关键词： 诺如病毒;装甲RNA;Qbeta噬菌体;标准参考样品;实时荧光定量RT-PCR

期刊名称： 中国生物工程杂志

ISSN： 1671-8135

年卷期： 2018 年 01 期

页码： 42-50

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的:针对目前检测领域缺乏诺如病毒(Norovirus,No V)核酸标准样品这一瓶颈,基于Qbeta噬菌体装甲RNA技术构建内含GII型No V检测靶标RNA的病毒样颗粒(virus like particles,VLPs)标准参考样品。方法:人工合成包含Qbeta噬菌体成熟酶编码基因、衣壳蛋白编码基因、包装位点、ISO/T15216-2 2012中规定的GII型No V检测靶标对应的c DNA序列及辅助多克隆位点的DNA片段QINVGII,将其克隆到p ET-28a(+)载体中,构建重组质粒p ET-QINVGII。将p ET-QINVGII转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞并诱导表达。表达产物经SDS-PAGE和透射电镜分析后,利用氯化铯密度梯度离心,制备纯化VLPs,并对纯化后的VLPs开展均匀性、稳定性及定值研究。结果:SDS-PAGE结果证实重组大肠杆菌在14.1k Da左右有目的条带表达;透射电镜下可观察到大量结构完整、直径约为25nm的VLPs。定值结果显示,制备的VLPs样品中GII型No V检测靶标RNA的含量为(1.06±0.06)×10~7copies/μl;均匀性分析结果表明样品均匀性良好,即F=2.24

分类号： R373

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