文献类型： 中文期刊
第一作者： 杨鸣发
作者： 杨鸣发;马云云;于志亚;刘家森;康洪涛;姜骞;曲连东
作者机构：
关键词： 小反刍兽疫病毒（PPRV）;芯片式数字PCR（cdPCR）;实时荧光定量PCR（RT-qPCR）
期刊名称： 中国动物检疫
ISSN： 1005-944X
年卷期： 2021 年 012 期
页码： 91-98
摘要： 为建立一种准确、快速、敏感性更高的小反刍兽疫病毒（peste des petits ruminants virus,PPRV）检测方法,建立了一种芯片式数字PCR（cdPCR）检测方法。根据GenBank中公布的PPRV Nigeria75/1疫苗株N基因序列设计1对引物,PCR扩增大小为166 bp片段,构建pMDTM18-N标准质粒并优化反应条件,建立了PPRV N基因cdPCR检测方法,并与实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测方法的灵敏性、重复性、特异性和临床样品检测做了比较分析。结果显示:当质粒标准品浓度在1.22×（105～102）copies/μL范围时,cdPCR检测方法比普通RT-PCR灵敏度高1 000倍,且稳定性好,特异性强;当标准品浓度在1.22×(105～10-3)copies/μL范围时,cdPCR与RT-qPCR相比具有相同的特异性,但灵敏性比RT-qPCR高100倍;与RT-qPCR测定结果（13.29±6.74）copies/μL相比,cdPCR的最低检测限更低,约为（0.44±0.14）copies/μL;cdPCR对47份临床样本的PPRV核酸阳性检出率（25.5%）高于RT-qPCR（17.0%）。结果表明,建立的cdPCR方法特异性强、灵敏度高、重复性好,为预防PPR早期流行提供了一种快速有效的诊断和定量检测方法。
分类号： S852.65
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