新城疫病毒F48E9株L基因的克隆及鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 闫丽辉

作者： 闫丽辉;曹殿军;刘培欣;孙建宏

作者机构：

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2000 年 S1 期

页码：

收录情况： 北大核心

摘要： 新城疫（ＮＤ）是由新城疫病毒（ＮＤＶ）引起的一种以呼吸道、消化道粘膜出血为典型症状禽类急性、高度接触性、致死性传染病，对养禽业危害极其严重。ＮＤＶ病毒粒子含有６种结构蛋白ＮＰ、Ｐ、Ｍ、Ｆ、ＨＮ和Ｌ。其中Ｌ是高分子量的ＲＮＡ依赖性ＲＮＡ聚合酶，它与ＮＰ、Ｐ共同参与病毒ＲＮＡ的转录与复制，形成有活性的ＲＮＡ。Ｌ蛋白分子量为２２０ＫＤ，其编码基因的长度几乎占整个病毒基因组的一半，在ＮＤＶ的复制过程中起着极其重要的作用，但由于其分子量巨大，对Ｌ蛋白功能的研究一直没有大的发展。目前所知Ｌ蛋白可能在病毒的转录和复制过程中起ＲＮＡ聚合酶的作用。为了进一步探 讨ＮＤＶ的致病与免疫机理，本研究对ＮＤＶＬ基因进行了克隆，目的是为了通过基因工程技术研究Ｌ蛋白的功能，以及ＮＤＶ的致病机理。我们以Ｆ４８Ｅ９株为研究对象，参考以发表的全基因序列，设计两对引物，用反转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）对 Ｆ４８Ｅ９株的 Ｌ基因进行分段 ＰＣＲ，两个片段大小分别是 ４０５０ｂｐ和 ３５０４ｂｐ，两者间有 ４４３ｂｐ的基因重复。将这两个片段分别克隆到 ｐＭＤ－１８Ｔ Ｖｅｃｔｏｒ上，对于初步筛选为阳性的重组子进行了进一步的酶切分析、质粒 ＰＣＲ鉴定，结果证实我们得到了这两个基因片段的阳性重组子。为了进一步验证所得到基因的可靠性，采用 Ｓａｎｇｅｒ的双脱氧末端终止法对阳性重组子从 ５’端进行核苷酸序列测定，获得了 Ｆ４８Ｅ９株２基因两个片端 ５’端的基因序列。利用 ＤＮＡＳＩＳ分析软件，将 Ｆ４８Ｅ９株和Ｌａ　Ｓｏｔａ株的相应序列进行比较，其核苷酸的同源性分别为８７．４％和８９％。Ｌ基因全序列的测定正在进行，至此我们获得了Ｆ４８Ｅ９株Ｌ基因的全长克隆。新城疫病毒F48E9株L基因的克隆及鉴定@闫丽辉$中国农科院哈尔滨兽医研究所!兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 @曹殿军$中国农科院哈尔滨兽医研究所!兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 @刘培欣$中国农科院哈尔滨兽医研究所!兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 @孙建宏$中国农科院哈尔滨兽医研究所!兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001国家重点基础研究发展规划项目!（Ｇ１９９９０１１９０２）;; 国家自然科学基金重大项目!（３９８９３２９０－４）

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