番石榴焦腐病菌LAMP检测方法的建立及应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 吴敏亮

作者： 吴敏亮;张溢溪;兰成忠;刘裴清;李本金;陈庆河;翁启勇

作者机构：

关键词： 番石榴;葡萄座腔菌;内转录间隔区;环介导等温扩增;钙黄绿素

期刊名称： 植物病理学报

ISSN： 0412-0914

年卷期： 2013 年 43 卷 06 期

页码： 574-580

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 以钙黄绿素(calcein)为指示剂,建立了番石榴焦腐病菌(Botryosphaeria rhodina)的环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)可视化快速检测方法。在该方法中,以番石榴焦腐病菌特异的核糖体转录间隔区(Internal transcribed spacer,ITS)序列为目的 DNA片段,设计4条引物(2条内引物、2条外引物),优化LAMP反应条件和反应体系,并进行特异性和灵敏度验证。研究确定最佳反应温度为64℃,反应时间1 h;特异性检测结果显示,15株不同地理来源的番石榴焦腐病菌和10份番石榴焦腐病病果组织LAMP产物均为阳性(绿色),而26株其它病原菌及10份健康番石榴果实组织LAMP产物均为阴性(橘黄色);灵敏度验证结果显示,该方法的检测灵敏度在DNA水平上可达到10 pg。实验结果表明,快速、准确、灵敏的LAMP检测方法适合基层部门及田间检测番石榴焦腐病菌使用。

分类号： S436.67

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