干扰素诱导跨膜蛋白3基因敲除Caco2细胞株的构建及其对水泡性口炎病毒复制的影响

文献类型： 中文期刊

第一作者： 庞照霞

作者： 庞照霞;郝鹏飞;屈巧巧;李乐天;李昌;金宁一

作者机构：

关键词： 干扰素诱导跨膜蛋白3（IFITM3）;CRISPR/Cas9;Caco2细胞;水泡性口炎病毒（VSV）

期刊名称： 中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2023 年 003 期

页码： 476-482

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 通过CRISPR/Cas9系统，旨在构建干扰素诱导跨膜蛋白3（IFITM3）基因敲除的人结直肠腺癌细胞Caco2,并探究IFITM3基因敲除对水泡性口炎病毒（VSV）复制的影响。针对人IFITM3基因靶向设计sgRNA,合成后连接至pLentiv2载体中获得重组质粒，经测序后将正确连接sgRNA的重组质粒及辅助质粒psPAX2、pMD2.G共转染293T细胞进行慢病毒包装并感染Caco2细胞，然后进行嘌呤霉素加压筛选，利用有限稀释法获取IFITM3基因敲除单克隆细胞。利用DNA测序和Western blot对所获得单细胞克隆进行鉴定，鉴定正确的细胞命名为Caco2-△IFITM3。用表达绿色荧光蛋白的VSV（VSV-EGFP）感染Caco2-△IFITM3细胞，通过荧光显微镜观察IFITM3敲除对VSV复制的影响。基因组DNA测序结果表明，在IFITM3基因开放阅读框产生了碱基缺失，细胞中IFITM3蛋白表达消失，但细胞活性未受明显影响。病毒感染试验可观察到Caco2-△IFITM3细胞感染比例显著高于Caco2细胞，表明敲除IFITM3使其抗病毒功能减弱。本研究通过CRISPR/Cas9技术成功构建了基于肠道细胞敲除IFITM3基因的Caco2单细胞克隆，验证了IFITM3敲除对细胞抗VSV感染的影响，为进一步深入研究IFITM3与肠道病毒的互作及其功能奠定基础。

分类号： S852.4

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