福氏志贺菌主动外排基因acrA的克隆及原核表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王松泰

作者： 王松泰;张继瑜;魏小娟;付元芳;曹小安;邱昌庆

作者机构：

关键词： 福氏志贺菌;acrA基因;克隆;原核表达

期刊名称： 中国人兽共患病学报

ISSN： 1002-2694

年卷期： 2008 年 24 卷 10 期

页码： 933-936

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的对福氏志贺菌外排基因acrA进行克隆和原核表达,为进一步研究其在志贺菌外排机制中的作用奠定基础。方法参考福氏志贺菌2aacrA基因序列设计一对特异引物,在引物的5′和3′端分别加入含有BamHⅠ和SalⅠ限制性酶切位点序列。以福氏志贺菌2a菌株基因组DNA为模板,通过PCR扩增acrA基因并与pMD18-T载体连接,然后转化DH5α。提取重组质粒pMD18-acrA,经BamHI/SalI双酶切并与载体pET30a连接后转化宿主菌BL21(DE3)pLys,通过IPTG诱导表达目的蛋白。结果克隆的acrA基因长度为1122bp,核苷酸序列与GenBank上公布的序列完全相同。原核表达经SDS-PAGE及WesternBlotting检测和鉴定,结果表明重组载体pET-30a-acrA可成功地在大肠杆菌中表达AcrA蛋白。结论成功构建了福氏志贺菌acrA基因的原核表达质粒,并在大肠杆菌中得到有效表达,该研究为了解AcrA蛋白的特性、功能以及对福氏志贺菌多药耐药机理的深入研究奠定了基础。

分类号： R378

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