西瓜细菌性果斑病菌现场快速双模荧光RPA检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王晨薇

作者： 王晨薇;汪小福;魏巍;陈笑芸;沈洁;徐俊锋;蔡健

作者机构：

关键词： 瓜类细菌性果斑病;实时荧光监测RPA;终端荧光可视化检测RPA;可视化

期刊名称： 浙江农业学报

ISSN： 1004-1524

年卷期： 2022 年 34 卷 007 期

页码： 1519-1528

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 瓜类细菌性果斑病菌(bacrerial fruit of blotch,BFB)是中国检疫性病害,其传播非常迅猛,且目前没有商品化抗病品种.为建立西瓜果斑病菌现场快速荧光重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplifica-tion,RPA)检测方法,针对细菌性果斑病菌特异性序列设计并筛选出了RPA最佳的引物和探针组合,利用两种模式[实时荧光监测RPA(real time RPA,RT-RPA)和终端荧光可视化检测RPA(end point RPA,EP-RPA)]对RPA的结果进行分析,并与实时荧光定量PCR(qRT-PCR)结果进行对比.结果显示,建立的细菌性果斑病菌双模荧光RPA检测方法特异性强,且其对病原物的检测灵敏度与qRT-PCR的灵敏度相当.在实际样品检测中,RT-RPA、EP-RPA和RT-PCR的检测结果一致性为100%.在检测时间上,EP-RPA的检测时间为20 min,RT-RPA平均检测时间约为5 min,qRT-PCR的平均检测时间约为44 min;RPA的检测速度最快,而且不依赖大型的仪器,方便快捷,适用于现场检测.该恒温快速检测方法的建立为植物病害的现场检测提供了新的技术支持.

分类号： S41

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