基于纳米抗体-荧光素酶的黄曲霉毒素B1检测方法构建

文献类型： 中文期刊

第一作者： 陈文星

作者： 陈文星;王凤华;谭晓亮;晏石娟;张军;吴绍文

作者机构：

关键词： 黄曲霉毒素B1;纳米抗体;纳米荧光素酶;快速检测;生物发光酶联免疫分析

期刊名称： 中国食品学报

ISSN： 1009-7848

年卷期： 2024 年 004 期

页码： 349-360

收录情况： EI ; 北大核心 ; CSCD

摘要： 黄曲霉毒素B1（AFB1）是一种剧毒、致癌的食源性污染物，严重威胁食品安全和公共健康。为开发快速检测AFB1的生物发光酶联免疫分析（BLEIA）方法，系统测试了3种抗AFB1特异性纳米抗体（NB）与纳米荧光素酶（Nluc）融合蛋白（G8-Nluc、Nluc-NB26和Nluc-NB28）的可溶性表达、纯化情况及酶催化活性。基于3种融合蛋白分别建立BLEIA检测体系，选择Nluc-NB26用于谷物样品的分析和验证。结果表明，Nluc-NB26的可溶性表达量最高，稳定性更好，Nluc-NB28的可溶性表达量次之，而G8-Nluc基本不可溶。不同表面活性剂对G8-Nluc的促溶解性研究表明，添加N-月桂酰肌氨酸钠可显著提高其溶解度，纯化得到的3种融合蛋白均具有良好的酶活性及抗原结合活性。基于融合蛋白的BLEIA检测结果显示，Nluc-NB28-BLEIA、G8-Nluc-BLEIA和Nluc-NB26-BLEIA体系检测AFB1的IC50值分别为4.213,1.697,2.169 ng/mL，表明G8-Nluc-BLEIA体系的灵敏度最高，Nluc-NB26-BLEIA与前者接近，Nluc-NB28-BLEIA最低。综合考虑融合蛋白的可溶性表达量、稳定性及检测性能，对Nluc-NB26-BLEIA开展实际样品的分析和验证，结果表明：这一方法检测谷物中AFB1的平均回收率在91.1%～104.1%之间，与商业化酶联免疫吸附测定试剂盒结果相似，而检测的时间和试剂成本明显降低。研究结果为开发快速、高灵敏的AFB1检测技术提供参考。

分类号： TS207.5%O657.3%TS201.6

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