肝片吸虫SAP-2蛋白的基因克隆、表达及其诊断潜力初步评估

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王熙凤

作者： 王熙凤;乔军;孟庆玲;陈英;钟文强;贡莎莎;黄运福;才学鹏

作者机构：

关键词： 肝片吸虫;SAP-2基因;原核表达;间接ELISA;诊断潜力

期刊名称： 西南农业学报

ISSN： 1001-4829

年卷期： 2018 年 12 期

页码： 2704-2709

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】为了研究肝片吸虫(Fh) SAP-2蛋白的反应原性及作为Fh血清学诊断抗原的潜力。【方法】本研究利用RT-PCR方法对Fh SAP-2基因进行扩增,将扩增产物克隆入p MD19-T载体后测序,对其进行分子特征分析;构建原核表达载体p ET-SAP-2,在E. coli BL21(DE3)中进行表达,通过SDS-PAGE和Western blot对表达的重组蛋白进行反应原性分析;以纯化的重组蛋白SAP-2(re SAP-2)为抗原,建立了检测Fh特异性抗体的间接ELISA,评估了SAP-2蛋白作为Fh血清学诊断抗原的潜力。【结果】Fh SAP-2基因全长306 bp,编码101个氨基酸。在线软件分析发现,SAP-2为疏水性、无跨膜区蛋白,信号肽位于第1～15个氨基酸之间。系统进化树分析表明,Fh SAP-2与曼氏裂体吸虫同源性最高,与其他寄生虫存在较大的差异。Western blot证实,re SAP-2蛋白可被Fh阳性血清特异性识别,有较强的反应原性。用re SAP-2蛋白建立了间接ELISA,对23份Fh阳性血清和10份阴性血清进行检测,结果证实re SAP-2蛋白有良好的特异性和敏感性。【结论】Fh SAP-2蛋白具有较强的反应原性,具有作为Fh血清学诊断抗原的潜力。

分类号： S852.735

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