猪胰岛素启动子调控EGFP表达载体的优化及体外验证

文献类型： 中文期刊

第一作者： 于淑珍

作者： 于淑珍;冯冲;石宁宁;宋小凤;潘登科

作者机构：

关键词： 胰岛素启动子PIP;特异性表达;小鼠胰岛素瘤β细胞株MIN-6细胞;EGFP;五指山小型猪

期刊名称： 中国实验动物学报

ISSN： 1005-4847

年卷期： 2014 年 06 期

页码： 34-39+5

收录情况： CSCD

摘要： 目的获得猪胰岛素启动子调控外源基因的高效表达载体,为制备转基因猪胰岛特异性表达目的基因奠定基础。方法利用猪胰岛素启动子(PIP,包含5'调控区、第一外显子、第一内含子及第二外显子ATG前的序列共1.5 kb)构建表达载体,连接PIP和EGFP的酶切位点HindⅢ设计在起始密码子前,命名为PIP-Hind IIIEGFP。鉴于酶切位点的插入位置可能会影响外源基因的表达效率,对载体进行了优化:将Hind III酶切位点删除,实现PIP和EGFP无缝连接,载体命名PIP-EGFP;将第一内含子3'端的内含子剪接受体位点(splicing acceptor site,SA)突变为Hind III内切酶识别位点,命名为PIP-SA(M)-EGFP。三种载体分别电转染小鼠胰岛素瘤β细胞株MIN-6细胞、猪耳成纤维细胞以及猪肾细胞,48 h后通过荧光强度、流式分析、RT-PCR及Western blot检测,验证载体的表达效率。结果转染细胞后,三种载体都仅在MIN-6胰岛β细胞表达绿色荧光。RT-PCR及其产物测序结果显示三种载体的胰岛素启动子第一内含子的剪切存在差异:载体PIP-Hind III-EGFP和PIP-EGFP的内含子存在剪切和不剪切两种情况,剪切不稳定;载体PIP-SA(M)-EGFP的SA位点突变后内含子不剪切,流式细胞及Western blot检测显示,与另外两种载体相比,该载体目的蛋白的表达量最高。结论通过突变胰岛素启动子第一内含子的3'端的剪接受体位点,成功获得了胰岛β细胞的高效表达载体,可用于制备胰岛特异表达外源基因的转基因猪。

分类号： R587.1

  • 相关文献

[1]血管内皮特异性表达人血栓调节蛋白转基因猪的研究. 田兴华,王梦佳,潘登科. 2018

[2]水稻OsHOX6启动子的组织特异性表达. 何丹,玉山江·麦麦提,杨渡,韩盛,Inez Hortense Slamet-Loedin. 2019

[3]小麦细胞色素P450(TaP450)基因的克隆与序列分析. 张斌,秦岭,郭凤丹,杨连群,边斐,范仲学,李娜娜,宫永超,蒲艳艳. 2014

[4]精氨酸激酶蛋白及分子生物学的研究进展. 苏晓峰,陆国清,程红梅. 2011

[5]棉花GhTCP2基因启动子分离及其在幼嫩组织的表达分析. 邢进,刘伟娜,赵琳琳,赵金凤,张文会,赵宝华,李学勇. 2013

[6]Lnc46198半番鸭胚胎期特异性表达及对鸭胚成纤维细胞增殖和凋亡的影响. 李丽,章琳俐,辛清武,缪中纬,朱志明,朱春红,邱君志,黄勤楼,郑嫩珠. 2023

[7]陆地棉TCP家族基因鉴定及组织表达分析. 胡文冉,赵准,邵武奎,黄全生. 2023

[8]内皮特异性表达人血栓调节蛋白的载体构建及体外表达. 宋小凤,石宁宁,冯冲,魏静,周艳荣,陈红星,潘登科. 2015

[9]油莎豆块茎特异性表达基因鉴定及分析. 张向歌,陈晨,程珊,李春鑫,朱雅婧,许欣然,王会伟. 2025

[10]蓖麻油酸12-羟化酶基因启动子克隆与分析. 王超,刘红光,刘婷婷,郭娇,谢凯丽,赵好,张晓明,徐刚,焦其庆,谭德云. 2024

[11]两启动子影响egfp在绿僵菌中的荧光表达. 王苗苗,涂雄兵,张雄鹏,农向群,曹广春,王广君,张泽华. 2015

[12]β_2肾上腺素受体基因在毕赤酵母中的表达及活性测定. 黄园园,沈红,王迪,于洪侠,孙丰梅,杨啸枫,杨曙明. 2008

[13]小鼠胚胎母源基因转向合子基因组的转换起始点. 肖红卫,华文君,华再东,任红艳,张立苹,郑新民,朱喆,毕延震. 2019

[14]卵泡抑制素与GFP融合基因疫苗pEGISI的构建及表达. 曹少先,茆达干,舒邓群,程宝,王进荣,刘铁铮,杨利国. 2007

[15]鸡源细胞基因沉默及快速筛选的实用型双标记RNAi载体. 李培培,游雷鸣,罗俊,鄂魏,蒋志政,郅玉宝,张改平,王爱萍. 2011

[16]用于构建双价禽流感DNA疫苗的双目的基因表达质粒的构建及鉴定. 黄冬,陈普成,刘兵,唐猛,柳金雄,姜永萍,陈化兰. 2016

[17]伪狂犬病病毒通用转移载体的构建及应用. 钱平,李祥敏,陈焕春,肖少波,仇华吉,童光志. 2003

[18]表达绿色荧光蛋白重组狂犬病病毒Flury-LEP的构建及其用于中和抗体检测的研究. 华涛,陶丽红,葛金英,王喜军,沈向真,步志高. 2010

[19]含O型口蹄疫病毒P1-2A-3C基因的羊痘病毒弱毒株转移载体的构建. 王建科,张强. 2010

[20]农杆菌介导的斑玉蕈遗传转化. 孙运奇,陈辉,张津京,陈明杰,冯志勇,汪虹. 2014

作者其他论文 更多>>

微信小程序