黄瓜动蛋白特异肽段的原核表达和多克隆抗体制备

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王燕

作者： 王燕;杨学勇;刘晓林;张晓孟;余宏军;蒋卫杰

作者机构：

关键词： 黄瓜;果实;动蛋白;肽段;原核表达

期刊名称： 园艺学报

ISSN： 0513-353X

年卷期： 2014 年 41 卷 06 期

页码： 1207-1217

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 以黄瓜果实总RNA为模板,通过RT-PCR获得了动蛋白基因CsKF1和CsKF2的cDNA序列,进行测序,构建T-easy载体。SMART在线预测CsKF1和CsKF2均含有动蛋白(Kinesin)约340个氨基酸残基的马达区保守序列(moter domain)。体外表达蛋白的马达区和非马达区,将带有His标签的CsKF1-N、CsKF2-C、CsKF1-M、CsKF2-M融合蛋白通过E.coli BL21(DE3)表达,摸索不同诱导条件下目的蛋白的表达和纯化。其中His-CsKF1-N、His-CsKF2-C、His-CsKF1-M原核表达蛋白的分子量分别为25、30和40 kD,均以0.1 mmol·L-1 IPTG,22℃6 h诱导表达效果最好。His-CsKF2-M原核表达蛋白的分子量约38 kD,以18℃8 h诱导表达效果最好。融合蛋白His-CsKF1-N和His-CsKF2-C经过亲和纯化后作为抗原,通过5轮免疫注射兔子后,取心脏血作为抗血清,通过AminoLink Plus kit试剂盒亲和纯化得到多克隆抗体anti-CsKF1-N和anti-CsKF2-C。经过Western blot分析表明多克隆抗体具有特异性,可与抗原特异结合。

分类号： Q943.2

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