密码子优化的RHDV2双VP60基因重组杆状病毒构建及表达蛋白免疫原性分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 于吉锋

作者： 于吉锋;谢晶;黄勇;肖璐;林毅;曹冶;叶勇刚;魏勇;吴学婧;李江凌;康润敏

作者机构：

关键词： 兔出血症病毒2型（RHDV2）;病毒样颗粒（VLP）;密码子偏好性;重组杆状病毒;免疫原性

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2024 年 002 期

页码： 668-677

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】试验旨在优化兔出血症病毒2型（Rabbit hemorrhagic disease virus 2,RHDV2）病毒样颗粒（virus-like particle, VLP）疫苗的制备策略，探究RHDV2 VLP疫苗对家兔的免疫原性，为低成本、高产量RHDV2新型疫苗研发提供新思路。【方法】根据昆虫细胞的密码子偏好性优化合成RHDV2 VP60全基因，将双VP60基因插入真核载体pFastBacTM Dual,转化携带Bacmid质粒的大肠杆菌DH10Bac感受态细胞，构建含双VP60基因的重组杆粒Bacmid-VP60-VP60,转染Sf9昆虫细胞，通过Western blotting、间接免疫荧光试验（IFA）及透射电镜对重组杆状病毒Bacmid-VP60-VP60进行表达验证；将优化策略制备的重组蛋白抗原与氢氧化铝佐剂按照9∶1比例制备VLP灭活疫苗，通过安全性检验、最小免疫剂量、免疫持续期等评估优化策略制备的RHDV2 VLP疫苗的保护效果。【结果】试验成功构建重组杆粒Bacmid-VP60-VP60。Western blotting鉴定结果显示，重组杆状病毒转染Sf9细胞表达出大小约60 ku的RHDV2 VP60蛋白。IFA鉴定结果显示，感染重组杆状病毒的Sf9细胞产生了大量的黄绿色荧光，表明重组杆状病毒在Sf9细胞中大量表达VP60蛋白。透射电镜观察结果显示，VP60蛋白折叠成VLP,大小为40 nm左右，呈现球形结构，表面光滑。优化策略制备的RHDV2 VLP疫苗对家兔具有良好的安全性和免疫原性，最小免疫剂量为0.5 mL/只，免疫持续期可达210 d以上。【结论】试验构建了含有密码子优化的双VP60基因的重组杆状病毒，并在昆虫细胞中成功表达RHDV2 VP60蛋白，该蛋白制备的VLP疫苗对家兔具有良好的免疫原性。

分类号： S852.65

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