西伯利亚鲟(Acipenser baerii)IFN-γ基因克隆、原核表达和单克隆抗体制备

文献类型： 中文期刊

第一作者： 田照辉

作者： 田照辉

作者机构：

关键词： 西伯利亚鲟;IFN-γ基因;原核表达;重组蛋白;单克隆抗体

期刊名称： 生物学杂志

ISSN： 2095-1736

年卷期： 2024 年 41 卷 006 期

页码： 69-73,110

收录情况： CSCD

摘要： 利用转录组信息克隆西伯利亚鲟IFN-γ的可读编码框(ORF)528 bp,编码176个氨基酸，具有IFN-γ的特征序列和核定位序列，参照此序列构建N端含有6His (组氨酸)的原核表达载体Pet30α-IFN-γ,转化至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG(异丙基硫代半乳糖苷)诱导表达，SDS-PAGE蛋白电泳和免疫印迹Western Blot鉴定，重组蛋白为22.8 ku,主要以包涵体形式存在，温度37℃时的最佳表达条件为0.75 mmol/L的IPTG诱导6 h,利用镍柱层析得到纯化的重组蛋白，重组蛋白免疫小鼠，进行细胞融合获得8株阳性细胞株，利用protein G亲和层析纯化的单克隆抗体效价为2×10～5,为深入研究西伯利亚鲟IFN-γ免疫学功能奠定基础。

分类号： S917.4

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