禽网状内皮组织增生病病毒gp90全长蛋白的原核表达、纯化及其免疫原性分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 高立

作者： 高立;祁小乐;高宏雷;高玉龙;秦立廷;孙芬芬;张云;王笑梅

作者机构：

关键词： 禽网状内皮组织增生病病毒;gp90蛋白;原核表达;纯化;多克隆抗体

期刊名称： 微生物学报

ISSN： 0001-6209

年卷期： 2009 年 49 卷 10 期

页码： 1380-1384

收录情况： CSCD

摘要： [目的]原核表达免疫原性良好的禽网状内皮组织增生病病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV) gp90 蛋白,并制备抗gp90蛋白高效价多克隆血清.[方法]利用PCR技术,以pMDl8T-env为模板,扩增得到REV的gp90蛋白编码基因,将其克隆入表达载体pET-28a(+)中,将构建的原核表达质粒pET28-gp90,转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)感受态细胞,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导后进行gp90蛋白表达并鉴定.用纯化的gp90蛋白免疫6-8周龄Balb/c小鼠,制备抗gp90的多克隆血清.用间接免疫荧光试验检测该血清的特异性,用酶联免疫吸附试验(ElJlSA)滴定其效价.[结果]REV gp90基因在重组大肠杆菌中正确表达,免疫小鼠后获得的抗血清可与重组杆状病毒表达的gp90蛋白特异性反应,ELISA效价达到1:12800,该研究为开展REV诊断试剂的研制奠定了基础.

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