芝麻高纯度线粒体DNA提取技术研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 黎冬华

作者： 黎冬华;王林海;张艳欣;吕海霞;张晓燕;刘佳;张秀荣

作者机构：

关键词： 芝麻;mtDNA;提取;DNase处理

期刊名称： 华北农学报

ISSN： 1000-7091

年卷期： 2011 年 26 卷 03 期

页码： 94-98

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 以2个芝麻品种黄化苗为试验材料,通过比较植物线粒体DNA(mtDNA)提取过程中的关键影响因素DNase处理时间,建立了一种经济、快速、高效的芝麻mtDNA提取方法。该方法分别通过匀浆化处理、2 400 g离心15min结合12 000 g离心12 min的差速离心方法分离获得粗制线粒体,再经过DNase酶切处理1.5 h去除基因组DNA的污染,然后经0.6 mol/L蔗糖衬垫离心获得纯的线粒体,通过SDS-蛋白酶K方法裂解线粒体获得芝麻mtDNA。经过核酸蛋白分析仪分析表明:本技术每1 g芝麻黄化苗能获得1μg以上mtDNA;通过1.0%琼脂糖凝胶电泳检测表明获得mtDNA完整,无明显降解;并利用三类特异引物(核基因特异引物beta-actin、线粒体基因特异引物rrn26S以及叶绿体基因特异引物ARCP5)进行PCR检测表明提取的mtDNA为高纯度。芝麻高纯度mtDNA提取技术的建立,为研究与芝麻线粒体基因有关的性状(如细胞质雄性不育、抗逆性等)奠定了技术基础。

分类号： S565.3

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