新城疫病毒F48E9株V基因的表达及其抗血清的制备

文献类型： 中文期刊

第一作者： 韩放

作者： 韩放;闫丽辉;曹殿军;刘培欣;李景鹏

作者机构：

关键词： 新城疫病毒;V基因;原核表达

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2006 年 36 卷 05 期

页码： 357-361

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 采用PCR方法从鸡源新城疫病毒(NDV)强毒F48E9株P基因重组质粒中扩增出了V 基因全长cDNA,并引进相应的突变位点,将其克隆到pMD18-T载体,然后亚克隆到原核表达载体 pET-30c上,重组质粒经酶切、PCR鉴定及测序,筛选出阳性重组质粒,并命名为pET-30c-V。将 pET-30c-V转化大肠埃希氏菌BL21(DE3),用1 mmol／L IPTG 37℃过夜诱导表达,SDS-PAGE 及Western-blotting分析结果表明,所表达的NDV V重组蛋白主要以包涵体形式存在,分子质量约28 ku,与理论值大小相符。将包涵体用8 mol／L脲变性,经Ni-NTA柱纯化,透析复性,得到纯化的V蛋白。用复性后的V蛋白免疫21日龄SPF鸡(300 μg／只),成功制备了抗鸡NDV V蛋白的抗血清。

分类号： S852.65`S852.5

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