快速检测A型流感病毒的Taq Man实时荧光定量RT-PCR方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 马继红

作者： 马继红;于海;周艳君;李国新;闫丽萍;张善瑞;王斌;童光志

作者机构：

关键词： A型流感病毒;TaqMan探针;实时荧光定量RT-PCR

期刊名称： 中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2010 年 03 期

页码： 1-7

摘要： 根据A型流感病毒基质蛋白(matrix protein,M)基因保守序列设计并合成特异性引物和TaqMan BHQ探针,建立快速检测A型流感病毒的实时荧光定量RT-PCR方法。通过RT-PCR方法克隆A型流感病毒M基因靶序列并将其连入pMD-18T载体,制备阳性标准品,优化反应条件,以10倍系列稀释的标准品绘制标准曲线,其相关系数为0.998。检测结果显示,该方法的灵敏度可达10 copies/μL或1 EID50病毒且特异性良好,除A型流感病毒外,对猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪圆环病毒2型、猪输血传播病毒检测结果均为阴性。该方法重复性好,批内和批间变异系数均小于3%。对40份实验感染样品的检测结果表明,该方法与病毒分离结果一致,比常规RT-PCR检测方法灵敏度更高,特异性更强。

分类号： S854.43

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