麦长管蚜嗅觉相关蛋白Gqα基因的克隆及真核表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 范佳

作者： 陈巨莲;程登发;孙京瑞

作者机构：

关键词： 麦长管蚜;嗅觉相关蛋白;G蛋白α亚基q类蛋白(Gqα);基因克隆;杆状病毒表达系统

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN： 1006-1304

年卷期： 2009 年 01 期

页码： 82-87

收录情况： CSTPCD

摘要： 根据已报道无脊椎动物嗅觉相关蛋白Gqα的氨基酸序列保守区设计简并引物,以麦长管蚜(Sitobion avenae)有翅成蚜cDNA为模板,结合RT-PCR及RACE技术扩增编码麦长管蚜Gqα蛋白的cDNA序列,其cDNA序列开放阅读框长为1 062 bp,编码352个氨基酸,预测蛋白分子量为40.8 kD,与GenBank多个物种GqαcDNA序列及氨基酸序列均有很高相似性(≥82.17%)(GenBank登录号为EF638906),并具有Gα亚基q类蛋白的典型特征。利用TOPO及Gateway技术,通过体外重组反应,构建苜蓿丫纹夜蛾核型多角体杆状病毒(Autographa californica nuclear polyhedrosis virus,AcMNPV)重组病毒。将N端融合了V5-His6标记的V5-His6Gqα序列整合到AcMNPV病毒基因组DNA中,得到具有独立转染活性的重组杆状病毒。转染粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)离体细胞系Tn-5B1-4(Tn细胞),进行Gqα蛋白的真核表达。SDS-PAGE检测到预期分子量约42kD的蛋白带,Western blot检测到表达产物。表明含有6个组氨酸标签及V5抗体结合位点的Gqα融合蛋白V5-His6Gqα在昆虫离体细胞系中成功地表达。

分类号： S433

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