两种新型快速检测猪SP-A基因方法的建立及对比

文献类型： 中文期刊

第一作者： 马妍妍

作者： 马妍妍;彭永刚;宋铭忻;崔尚金

作者机构：

关键词： SP-A基因;实时荧光定量PCR;TaqMan探针;纳米金PCR

期刊名称： 黑龙江畜牧兽医

ISSN： 1004-7034

年卷期： 2014 年 11 期

页码： 25-29

收录情况： 北大核心

摘要： 为了研究如何提高SP-A基因表达量的检测效率,试验建立了实时荧光定量PCR法以及纳米金PCR方法,根据猪表面活性蛋白A(SP-A)基因的mRNA序列(NM_214265.1)设计并合成引物及配套TaqMan探针,采用猪SP-A基因CDS区全序列连接pMD-18T载体构建新质粒pMD-SPA为阳性标准品,扩增方程为:Y=-3.375X+40.41,扩增效率为98%,R2达到0.999,Ct值批内变异系数及批间变异系数都小于3%。标准品的Ct值与模板的起始浓度有良好的线性关系,最低检测浓度可达2.53×101copies/μL,沿用上述引物建立了纳米金PCR方法,摸索了该方法的最佳反应条件,并对其灵敏度进行了测定。结果表明:钠米金PCR法亦能扩增得到与试验设计相符的特异性条带,灵敏度与荧光PCR方法相当。

分类号： S828

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