基于猪细小病毒6型VP1蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立及应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 欧云文

作者： 欧云文;潘琴;汪洋;代军飞;任绍科;张洋;张杰

作者机构：

关键词： 猪细小病毒6型（PPV6）;VP1蛋白;截短表达;ELISA

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN： 1674-7968

年卷期： 2024 年 006 期

页码： 1462-1470

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 猪细小病毒6型（Porcine parvovirus type 6, PPV6）是一种新发现的猪细小病毒，可导致猪（Sus scrofa）出现繁殖障碍，严重威胁养猪业健康发展。为建立一种检测PPV6抗体的间接ELISA方法，本研究以PPV6流行毒株高度保守的病毒颗粒蛋白（virion protein, VP1）（348～675 aa）的编码基因为目标片段，构建原核表达载体pET30a-PPV6-VP1，转入大肠杆菌（Escherichia coli） BL21（DE3）感受态细胞，IPTG诱导表达，进行Ni-NTA树脂亲和层析纯化，获得具有良好的反应原性的重组VP1蛋白，大小约为40 k D。基于纯化的重组VP1蛋白建立间接ELISA抗体检测方法，优化出最佳抗原包被浓度为1 ng/μL，待检血清最佳稀释比例为1∶100,HRP-兔抗猪IgG稀释比例为1∶60 000，阳性临界值OD450＞0.62。该间接ELISA检测方法与猪蓝耳病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV）、古典猪瘟病毒（Classical swine fever virus, CSFV）、猪伪狂犬病毒（Pseudorabies virus, PRV）、日本乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus, JEV）、猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type 2, PCV2）、PPV1阳性猪血清均不发生交叉反应，敏感度达1∶3 200，批内变异系数和批间变异系数均＜10%，与病毒中和试验（virus neutralization test, VNT）结果呈正相关，与Western blot结果的阳性符合率为96.6%，表明该间接ELISA检测方法拥有良好的特异性、敏感性、重复性和符合率。采用建立的间接ELISA方法对2018～2022年中国西部地区部分省份收集的452份猪血清进行检测，结果显示样品阳性率为5.31%，表明该病在我国西部地区存在不同程度的感染。本研究成功截短表达了PPV6 VP1（348～675 aa）蛋白，建立了特异性强、灵敏度高、重复性好和符合率高的PPV6间接ELISA方法，为PPV6的血清学调查和检测试剂盒的开发提供了材料。

分类号： S858.28

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