基于猪细小病毒6型VP1蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立及应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 欧云文

作者： 欧云文;潘琴;汪洋;代军飞;任绍科;张洋;张杰

作者机构： 开江县动物疫病预防控制中心;家畜疫病病原生物学国家重点实验室;中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室

关键词： 猪细小病毒6型（PPV6）;VP1蛋白;截短表达;ELISA

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN： 1674-7968

年卷期： 2024 年 006 期

页码： 1462-1470

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 猪细小病毒6型（Porcine parvovirus type 6, PPV6）是一种新发现的猪细小病毒，可导致猪（Sus scrofa）出现繁殖障碍，严重威胁养猪业健康发展。为建立一种检测PPV6抗体的间接ELISA方法，本研究以PPV6流行毒株高度保守的病毒颗粒蛋白（virion protein, VP1）（348～675 aa）的编码基因为目标片段，构建原核表达载体pET30a-PPV6-VP1，转入大肠杆菌（Escherichia coli） BL21（DE3）感受态细胞，IPTG诱导表达，进行Ni-NTA树脂亲和层析纯化，获得具有良好的反应原性的重组VP1蛋白，大小约为40 k D。基于纯化的重组VP1蛋白建立间接ELISA抗体检测方法，优化出最佳抗原包被浓度为1 ng/μL，待检血清最佳稀释比例为1∶100,HRP-兔抗猪IgG稀释比例为1∶60 000，阳性临界值OD450＞0.62。该间接ELISA检测方法与猪蓝耳病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV）、古典猪瘟病毒（Classical swine fever virus, CSFV）、猪伪狂犬病毒（Pseudorabies virus, PRV）、日本乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus, JEV）、猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type 2, PCV2）、PPV1阳性猪血清均不发生交叉反应，敏感度达1∶3 200，批内变异系数和批间变异系数均＜10%，与病毒中和试验（virus neutralization test, VNT）结果呈正相关，与Western blot结果的阳性符合率为96.6%，表明该间接ELISA检测方法拥有良好的特异性、敏感性、重复性和符合率。采用建立的间接ELISA方法对2018～2022年中国西部地区部分省份收集的452份猪血清进行检测，结果显示样品阳性率为5.31%，表明该病在我国西部地区存在不同程度的感染。本研究成功截短表达了PPV6 VP1（348～675 aa）蛋白，建立了特异性强、灵敏度高、重复性好和符合率高的PPV6间接ELISA方法，为PPV6的血清学调查和检测试剂盒的开发提供了材料。

分类号： S858.28

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