烟草NteIF2α的原核表达、纯化及多克隆抗体制备和应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 陈德鑫

作者： 陈德鑫;李雯雯;李思斌;李宁;郭豪;龙月;杨永霞;贾红昉;张洪映;崔红;张松涛

作者机构：

关键词： 烟草;真核翻译起始因子2α(eIF2α);原核表达;蛋白纯化;多克隆抗体

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN： 1674-7968

年卷期： 2016 年 01 期

页码： 50-57

收录情况： CSCD

摘要： 真核翻译起始因子2α(eukaryotic translation initiation factor 2α,e IF2α)在真核生物的蛋白合成调控中起重要作用。为了研究e IF2α的功能及其参与的烟草(Nicotiana tabacum)蛋白翻译调控机制,本研究首先构建了原核表达载体p ET15b-Nte IF2α,并使用0.2和0.5 mmol/L异丙基-β-d-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-d-thiogalactoside,IPTG)诱导4 h,在大肠杆菌(Escherichia coli)表达菌BL21-Codon Plus-(DE3)-RIPL中成功表达了烟草K326的Nte IF2α蛋白,并采用Western blot对表达的蛋白进行了鉴定。其次,对Nte IF2α的原核表达条件进行优化,结果表明,在16℃、0.2 mmol/L IPTG诱导13 h,在大肠杆菌上清中获得了可溶性的Nte IF2α蛋白。采用Ni2+-NTA琼脂糖亲和层析柱和分子筛柱对获得的重组蛋白进行纯化,获得条带单一的纯蛋白。最后,制备了具有较高特异性和灵敏性的Nte IF2α多克隆抗体,酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)检测结果表明,Nte IF2α抗体的效价为1∶400 000。采用制备的抗体对Nte IF2α在烟草K326不同组织的表达情况进行了检测,结果表明,Nte IF2α在叶片中表达最高,在根、茎和叶片中的表达量较低或者不表达。本研究实现了Nte IF2α蛋白的原核表达和纯化,制备了高效特异的Nte IF2α抗体。研究结果为进一步探索植物e IF2α的功能及其参与的蛋白翻译调控机理提供了基础资料。

分类号： Q943.2

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