携带双串联卵清蛋白T细胞表位的嵌合兔出血症病毒衣壳蛋白自聚能力的研究
文献类型: 中文期刊
第一作者: 张燕
作者: 张燕;胡波;宋艳华;范志宇;魏后军;姜平;王芳
作者机构:
关键词: 兔出血症病毒;VP60;双串联OVA T细胞表位;病毒样颗粒
期刊名称: 华北农学报
ISSN: 1000-7091
年卷期: 2014 年 29 卷 01 期
页码: 59-65
收录情况: 北大核心 ; CSCD
摘要: 以兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白VP60为载体,构建VP60携带双串联OVA T细胞表位(Ovalbumin,卵清蛋白第257~264位氨基酸)的嵌合蛋白,研究外源基因对VP60蛋白表达及病毒样颗粒(VLPs)装配的影响,分析VP60作为载体对外源基因长度的耐受性。运用基因克隆和重组技术,通过2次SOE法(Splicing by overlap extension,重叠延伸剪接术),将双串联OVA T细胞表位(257~264位氨基酸)的基因序列取代VP60第302~309位氨基酸的基因序列,得到嵌合VP60基因。利用杆状病毒表达系统表达嵌合蛋白,命名为DC。经IFA、SDS-PAGE、Western Blot、RT-PCR方法鉴定嵌合蛋白的表达,并通过电镜观察嵌合蛋白自聚为病毒样颗粒的能力。嵌合VP60蛋白在杆状病毒表达系统中得到高效表达,且可自聚形成病毒样颗粒。携带双串联外源表位的嵌合VP60蛋白得到有效表达,并可形成VLPs。该研究为嵌合VP60 VLPs的形成、结构功能的研究奠定基础,同时扩展了VP60作为载体可携带的外源基因耐受性的研究资料。
分类号: S858.291
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