腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白与绵羊白细胞介素－2融合基因表达载体的构建及表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王克坚

作者： 王克坚;Dhungyel O;余兴龙;冯书章;赵宝华;Egerton J R;朱平;殷震

作者机构：

关键词： 腐蹄病;节瘤拟杆菌;纤毛蛋白基因;绵羊白细胞介素2基因;基因工程疫苗;免疫

期刊名称： 中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2002 年 22 卷 2 期

页码： 131-133

收录情况： CSCD

摘要： 根据腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白基因（Pili基因）序列，在Pili基因619bp EheⅠ酶切位点上插入绵羊白细胞介素-2基因（OviIL-2基因），构建了Pili基因与OviIL-2基因的融合基因表达载体。先用EcoRⅤ、BamHⅠ双酶切pBlue-script-OvilIL-2重组质粒，获得两端具有EcoRⅤ、BamHⅠ位点的OviIL-2基因片段，用Klenow补平后，与经EheⅠ酶切后的重组质粒PME290-Pili进行平端连接；转化JM105感受态细胞，筛选阳性克隆，分别用BamHⅠ、EcoRⅠ、XbaⅠ、BalⅡ、PvuⅡ等进行酶切鉴定。然后将阳性重组质粒转染BL-21表达宿主感受态细胞，用0.1mol/L MgCl2沉淀法和超声波裂解法提取BL-21表达Pili基因与OviIL-2基因融合基因表达蛋白。对流免疫电泳对重组融合蛋白的特异性分析证明，融合蛋白主要在宿主菌体中表达；SDS-PAGE电泳结果表明，重组融合蛋白分子大小约为33000，表达产物的量约占菌体的5.49。

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